1、产品内容：

* KEIris 5× RT All-in-One Mix  包含以下组分：逆转录酶，RNA 酶抑制剂，

dNTPs, buffer，Oligo(dT)20VN 和随机引物。

2、储存条件：

储存于-20℃，有效期一年。

3、产品介绍

① KEIris RT mix with DNase（All-in-One）是将 RNA 合成cDNA 的一个操作更为简便的系统，含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂，仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应，操作非常方便。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推荐用于PCR、qPCR 反应。

② 该预混液采用特制的高效 DNase，该酶具有热敏感性， 可在高温条件下快速不可逆地失活，因此仅需一次加样，即可同管进行去除基因组 DNA 污染与逆转录反应，与使用DNase I 去除基因组 DNA 污染相比，无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅减少了对 RNA 模板的损伤、降低 RNase 污染风险，而且节省实验时间。

4、使用方法

① 在冰浴的无核酸酶的离心管中配制下列逆转录体系：

               注：推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。

② 轻轻混匀，瞬时离心（使液体沉于底部）；

③ 在PCR仪上进行下列条件的反应： 

    37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；

    55℃，温育 15 min；

    85℃，孵育 5 min，以终止反应

④ 将获得的产物迅速置于冰上或立即保存于-20℃，用于后续实验。

5、注意事项：

① RNA 模板的纯度和完整性是影响逆转录效果的重要因素， 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等杂质会使 RNA 降解。

② 若后续实验为 qPCR，逆转录产物的加量应不超过 PCR 体系终体积的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反应体系，逆转录产物的加量应不超过 2 μL。

③ 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。