1. 产品内容：

注：微量体积试剂请在正式实验开始前进行瞬时离心操作

2. 储存条件：

4℃保存，一年有效（避免冷冻）。

3. 产品介绍：

TRLIP高效DNA Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸DNA转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

TRLIP高效DNA Transfection Reagent转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。TRLIP高效DNA Transfection Reagent主要适用于DNA 等单一成分的细胞转染。

TRLIP高效DNA Transfection Reagent转染过表达质粒后，通常24-48h后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48h显著高于转染后24h。

TRLIP高效DNA Transfection Reagent转染细胞时，基本不受细胞培养液中血清影响，即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染4-6h后可去除转染液。

4. 使用方法：

① DNA转染

对大多数细胞来说，DNA(μg)与TRLIP2000DNA (μl)的比例为1:2-1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 以24孔板为例

贴壁细胞： 转染前一天，用500 μl不含抗生素的培养基接 种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。 悬浮细胞：在准备DNA-TRLIP2000DNA复合物之前，用500ul不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。

2. 对每个转染样品，进行以下操作

a. 在eppendorf管里分别加入50 μl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 μg DNA轻柔混匀（不能涡旋或离心） ，制成DNA稀释液。

b. 在另一个eppendorf管里分别加入50μl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 μl TRLIP2000DNA(注意用前 先混匀)，轻柔混匀，制 成TRLIP2000DNA 稀释液，室温静 置5分钟。

c. 将DNA稀释液和TRLIP2000DNA稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-TRLIP2000DNA复合物。DNATRLIP2000DNA复合物在室温下可稳定存在6小时。

3. 将DNA-TRLIP2000DNA复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。

4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。

5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1 :10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

② 优化DNA转染

质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细 胞毒性的影响，可以对DNA和TRLIP2000DNA的比例以及细 胞密度进行优化，一般在1:0.5-1:5的范围内优化DNA (μg)和TRLIP2000DNA (μl) 的比例。

不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及TRLIP2000DNA 用量

常见细胞的TRLIP转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别）

Lip转染试剂用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）

5.注意事项

1. 使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养液 或普通的 DMEM 培养液。
4. TRLIP高效DNA Transfection Reagent转染试剂不能 vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。
5. 转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露空气中。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。