组织样本消化的操作步骤详解：

（1）实验准备：碎冰、解冻酶/终止液；PBS 预冷；40 μm 无菌细胞筛，离心管、离心机等预冷；眼科剪、镊子等无菌处理。

（2）组织收集：无菌条件下收集组织，立即置于冷的 PBS 中，尽可能4h 内处理，如需放置更长时间，请使用高活性组织保存液。

（3）清洗组织：将组织用组织清洗液（或预冷 PBS）1-2 次以去除血液、坏死组织等杂质，称重记录。

（4）剪碎组织：将清洗后的组织转移至解离管中，用锋利眼科剪碎成1-3mm³小块，剪至泥糊状，剪得越碎酶解就越充分，单细胞酶解时间就会越短；如有配备组织单细胞解离仪，觉得剪碎较麻烦也可不用严格剪碎，同样能获得较好的解离效果。（5）组织消化：根据组织块大小加入适当体积的消化液（消化液体积为组织块体积的6-10倍）；在 37℃恒温培养箱或恒温摇床中进行组织消化。每隔 5-10min 确认一下解离情况，不同组织解离完全的时间从 5min 到 50min 不等，在保证解离效果情况下尽可能减少酶解时间，酶解完全即可终止酶解。

备注：根据组织和所加酶体积选择在 1.5mL EP 管或 5mL EP 管中，将解离酶与组织充分混匀，用剪刀将 1mL 移液枪枪头口稍微剪大后，用移液枪用力吹打混合物，如吹打堵塞枪头说明组织剪碎不够彻底，可继续剪碎组织或将枪头再剪大一些，用移液枪反复吹打混合物十余次后立即放入 37℃培养箱、水浴或金属浴中孵育，有摇床效果更佳，每孵育 5 分钟需进行一次反复吹打，直至组织团块完全解离成单细胞悬液。

(6)细胞过滤：待组织完全解离后，立即瞬离解离管 3s，并将解离管插在冰上，用移液枪吸取上清通过 40 μm 的滤网进行过滤，过滤全程在冰上操作。

(7)终止酶解：取等量的酶解终止液或完全培养基进行终止酶解。

(8)收集细胞：4℃、400g 离心 5 分钟后弃上清，用预冷的 PBS 清洗后再离心弃上清。

(9)红细胞裂解：取适量红细胞裂解液重悬细胞沉淀，冰上孵育 10 分钟，间歇吹打轻摇，4℃、300g 离心 5 分钟后弃上清。(10)清洗：取预冷的 PBS 重悬，4℃、300g 离心 5 分钟后弃上清，重复清洗2 次。（预防污染，推荐用细胞清洗液进行清洗）

(11)去除碎片：如碎片较多，可用高效碎片去除剂去除碎片。

(12)细胞活性检测：台盼蓝或 AOPI 染色，活细胞率应＞85%。

(13)细胞冻存：如细胞解离完成后暂时无法进行后续实验，可使用高效高活细胞冻存液将单细胞重悬后直接冻存于-80℃。

注意事项本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗。操作过程中请注意无菌操作，避免污染。建议根据具体组织类型和实验需求优化消化时间和消化液浓度。