包 装 量:
目录编号
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包装单位
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RE127-01
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250次
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RE127-02
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1000次
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产品组成、储存、浓度:-20℃ 保存1年。浓度: 1U/μl
制品说明:
DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
产品特点:
本产品使用本公司特有的DNase和独特的反应液消化后不需要繁琐的苯酚/氯仿抽提灭活;也不需要在加热灭活前加入EDTA,避免了在RNA中引入EDTA抑制下游的反转录反应,使用起来非常快速,方便。
活性单位:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
来源:大肠杆菌表达的31kd重组蛋白 。
酶贮存缓冲液:50 mM Tris-HCl (pH7.5),10 mM CaCl2,50% (v/v)glycerol。
10×反应缓冲液:100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃),25 mM MgCl2,1 mM CaCl2。
纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
适用范围:
制备不含DNA的RNA样品; RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染; 体外T7, T3, SP6等RNAPolymerases催化的RNA转录后去除DNA模板;DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片断文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
反应体系与条件:
1、在RNAse free管里面加入以下成分
RNA
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1μg (<8μl)
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10×DNase Buffer
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1μl
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DNase I
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1μl
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RNAse free water
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Up to 10μl
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2、37℃孵育30分钟。
3、65℃孵育10分钟,灭活DNase I。
4、取适量或者全部10μl的处理过的RNA直接用于反转录荧光定量PCR。
注意事项:
每μg RNA使用1 unit DNase I。如果RNA少于1μg,使用1 unit DNase I。如果使用RNA大于1μg,需要根据RNA的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer使用量和反应体积。