目录号：RE132

试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1、所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：

本试剂盒使用离心吸附柱硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。在高盐条件下RNA 与硅胶吸附膜高效、专一地结合，同时最大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，在低盐条件下，RNA 被洗脱。可处理的RNA 样品量可高达50μg。本试剂盒用于从酶反应液（如DNase 处理、蛋白酶处理、RNA 标记等）中纯化回收RNA，也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。 纯化的总RNA没有蛋白的污染，所得的RNA可用于Northern blot、Dot blot、mRNA 提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。

操作步骤：

提示：

    ● 第一次使用前请先在漂洗液RB瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

    ● 以下所有步骤均可以在室温进行，但是应该迅速操作，减少RNA降解机会。

1、冰上RNA样品加入 RNase-free water 补足至100μl，加入350μl 结合液RS，混匀。

2、加入250μl 无水乙醇，混匀，无需离心。

3、上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱AC中（吸附柱套在收集管CT内），4℃ 12,000 rpm 离心45秒，弃掉收集管CT中的废液，将吸附柱重新套回收集管CT。

如需去除DNA微量残留，可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化，详见附录。

4、加 0.5ml 漂洗液RB（请先检查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm 离心45秒，弃废液。

5、加 0.5ml 漂洗液RB，4℃ 12,000 rpm 离心45秒，弃废液。

6、4℃ 13,000 rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

7、取出吸附柱AC，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water，离心一分钟，合并两次洗脱液。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

附录：DNase I 柱上消化

本试剂盒还可以进行离心柱上DNA酶消化以去除RNA样品中微量DNA污染, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,可以购买各种商品化的RNase free DNase直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA，然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。客户可根据需要向本公司购买去蛋白液PRS。

以RN3401 DNase I 柱上消化试剂盒举例（货号：RE128）

DNase I 工作液的配制：

取45μl DNase I buffer和5μl RNase free DNase I离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。

注：如果残留DNA过多导致消化不完全，可按比例加大使用酶量来提高消化效果（如90μl DNase I buffer和10μl RNase free DNase I）。

操作步骤：

1、前面按照正常步骤操作，在步骤3完成后按照以下步骤操作。

2、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS，12,000 rpm 离心30 秒，弃废液，将吸附柱放回收集管CT中。

3、向吸附柱AC 中央加入50μl的DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置15 分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。

4、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS， 12,000 rpm 离心30-60 秒，弃废液，将吸附柱放回收集管CT中。

5、接漂洗液RB步骤等后续步骤。如果是其它公司试剂盒，则接最后的一个漂洗液漂洗等后续步骤。