包装量:
组成
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RE135-01
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RNase Inhibitor
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50μl
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产品储存:-20 ℃保存,避免起泡,避免剧烈振荡或搅拌。
产品介绍:
本制品是经过大肠杆菌表达的重组蛋白,与RNase A形成1:1复合体,对RNase 表现高度的非竞争性抑制(Ki=3×10-10 M)。该反应是可逆的,通过尿素及疏基类试剂能够解离复合体,使RNase 复活而抑制剂不可逆失活。本品属蛋白质性质,与其它竞争性抑制剂(核酸类、无机磷酸类)不同,可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去。
活性定义:抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1、加入
Components
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Volume
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Total RNA/mRNA
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50 ng-5 μg/5-500 ng
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Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or
Random Primer(0.1 μg/μl) or
GSP(Gene Specific Primer)
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1 μl
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1 μl
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2 pmol
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dNTP Mixture (10 mM each)
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1 μl
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5× RT Buffer
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4 μl
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RNase Inhibitor(40 units/μl)
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0.5-1 μl
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TUREscript Hˉ RTase
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1 μl
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RNase free H2O to final volume
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20 μl
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2、轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP),42℃孵育50min。
如用Random Primer,25℃孵育10 min,42℃孵育50 min。
3、70℃加热5 min失活TUREscript Hˉ RTase。
RT-PCR
反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于-20°C。