1/适用范围：

适用于快速提取各种酵母基因组DNA。

2/试剂盒组成、储存、稳定性：

                 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

3/储存事项:

1、环境温度低时酵母裂解液YS中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2、蛋白沉淀液PPS可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4/产品介绍：

本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下， 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

5/产品特点：

1、不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。

2、快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。

3、结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。

6/操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

1、吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml离心管；2,500 x g离心2分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。

2、高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。

3、加入20 ml酵母裂解液YS，涡旋振荡混匀，或者用1ml的枪头反复吹打混匀。

酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。

4、将裂解物放置在70℃水浴15-30分钟。

如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。

5、冰上至少5分钟使回复到室温。

6、在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml蛋白沉淀液PPS后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5分钟。

7、2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

8、小心缓慢吸取上清到一个新的100ml离心管中，不要吸到沉淀。

吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

9、加入等体积的室温异丙醇，颠倒30次混匀或者直到出现絮状DNA沉淀（或者白色浑浊沉淀）。

10、2,500 x g离心5分钟(可根据需要调整加大离心力)，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。

11、加入20ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，2,500 x g离心2分钟， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。

注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

12、加入1-3ml DNA溶解液DS重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。

13、加入0.5-1ml RNase A（10mg/ml），颠倒混匀，37℃温育30－60分钟去除残留RNA。

该步骤主要作用为去除残留的RNA，如果残留RNA多，可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA不影响实验，可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验，也可以用等体积酚/氯仿抽提去除，然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。

14、DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。