1/适用范围:
适用于快速提取各种病毒DNA。
2/试剂盒组成、储存、稳定性:
试剂盒组成
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保存
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50次(DE131-01)
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裂解液DLB
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室温
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20 ml
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去蛋白液RE
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室温
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25 ml
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漂洗液WB
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室温
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15 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
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洗脱缓冲液EB
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室温
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15 ml
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吸附柱DA
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室温
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50个
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收集管CT(2ml)
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室温
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50个
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室温储存12个月不影响使用效果, 各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3/产品介绍:
采用特异性结合病毒DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA。该产品可以满足绝大多数的病毒DNA的提取要求, 如病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。病毒裂解后,DNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR、酶切、杂交等分析。
4/产品特点:
① 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
② 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
③ 多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种操作,包括PCR、酶切、杂交等。
5/操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1、200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl 裂解液DLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱DA中,(吸附柱放入收集管CT中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管CT中的废液。如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱DA中。
5、加500μl去蛋白液RE,12,000rpm离心30秒,弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液WB,重复一遍。
7、将吸附柱DA放回空收集管CT中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱DA,放入一个新的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl 洗脱缓冲液EB(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好), 室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃,如果要较长时间存放,可以放置在-20℃。