1/适用范围：

适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。

2/试剂盒组成、储存、稳定性：

                                    本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果

3/储存事项：

① 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

② 为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1ml灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20μl)分装冻存，－20℃保存。

③ 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。仔细阅读注意事项4。

4/产品介绍：

本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。

5/产品特点：

① 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

② 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

③ 配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。

④ 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

6/注意事项：

① 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

② 开始实验前将需要的水浴先预热到所需温度备用。部分样品需要准备1M DTT。

③ 结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

④ Poly Carrier：Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少（例如小于10μl全血和法医样品），我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液， 将结合液CB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

7/操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1. 血液样品
   1. 取1-100μl血液到1.5ml 的离心管中。
   2. 如果不足100μl，加入裂解液ML补足到100μl。
   3. 加入10μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入100μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。

如果处理样品<10μl,建议在100μl结合液CB 中加入1μl Poly Carrier储存溶液。

1. 4. 冷却后加入50μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置3分钟。

如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

1. 5. 接操作步骤项下7。
2. 干血点

1. 用打孔机打孔的方法在血卡(上面有干血点) 上冲取3mm(1/8英寸) 直径血卡小片(上面有干血点),最多将3个直径3mm血卡小片放入1.5ml 的离心管中。

一般血液应该点在特定纸或者血卡上面干燥,如903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.

2. 加入180μl裂解液ML。
3. 加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。
4. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。

如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。

5. 加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀。

如果只处理一个3mm血卡小片，建议在200μl结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液。

6. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇10分钟。

如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每3分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。

7. 接操作步骤项下7。

3. 组织样品

1. 新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块（切成微块可以提高产量）后取<10mg，转入装有180μl裂解液ML的1.5ml离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。
2. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
3. 将裂解物放置在56℃水浴过夜或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

    对于小量的组织，一般4－6小时即可，但是过夜消化可以得到最佳结果。

4. 加入200μl 结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀。

     如果处理样品量少, 建议在200μl结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液。

5. 冷却后加200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置5分钟。
6. 如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
7. 接操作步骤项下7。

4. 口香糖

1. 将30mg口香糖切成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
2. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇至少3小时。

如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。

3. 加入200μl 结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
4. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。

如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。

5. 冷却后加200μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。
6. 最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管CT中的废液。
7. 接操作步骤项下8。

5. 法医材料
   0. 剪下1 cm2烟头或者过滤嘴外层纸，切成6小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   0. 剪下0.5-2.5 cm2信封或者邮票，切成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   0. 从毛发根部毛囊处开始剪下0.5-1 cm长度毛发放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   0. 将指甲剪成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。
   0. 将约0.5cm2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) (如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。

2. 56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。

如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。

一般毛发1小时裂解可以完成，如果不完全可以延长时间。指甲等难裂解物建议过夜裂解。最后没有裂解的不溶物在后续步骤e中会通过离心去除。

3. 加入200μl结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
4. 70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
5. 最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管CT中的废液。
6. 接操作步骤项下8。

6. 微切割样品（包括福尔马林固定的微切割样品）

1. 加入15μl裂解液ML 到0.2 ml 离心管中，放入微切割样品。
2. 加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) ，立刻涡旋振荡充分混匀。
3. 56℃水浴3小时（福尔马林样品16小时）至裂解完全，中间不时颠倒涡旋。
4. 加入15μl裂解液ML，再加入50μl结合液CB（加入1μl PolyCarrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
5. 冷却后加入50μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置5分钟。

如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

6. 接操作步骤项下7。

7. 将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱DA中，（吸附柱放入收集管CT中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管CT中的废液。
8. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。
9. 加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
10. 加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
11. 将吸附柱DA放回空收集管CT中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12. 取出吸附柱DA，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20－50μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置2-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

13. DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。