一、适用范围：

针对唾液样本中的DNA进行收集、保存、运输、纯化。

替代或者配套Oragene 唾液收集管使用。

二、试剂盒组成、储存、稳定性：

                        本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

三、储存事项:

① 细胞裂解液CB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

② 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

四、产品介绍：

传统的人类基因组DNA样品的采集往往需要抽血采集并提取全血基因组DNA获得。该方法有几个明显的缺点：需要一定的采血设备并需要具有医务知识的人员来完成；抽血的疼痛造成排斥拒绝采样；侵入性采集增加了感染的可能性；采集后血液样品必须低温运输保存。本试剂盒可提供无疼痛、非侵入性的方法，患者不用忍受抽血的疼痛和感染的风险就能获得高质量、高数量的样品，受测者排斥性低，婴儿和老人都能方便取得DNA样本。收集过程十分简单，受测者将唾液吐至保存液SS内混匀就完成收集过程。混匀后常温下可运输保存长达一年不会变质。能够节省运送、保存冷藏设备和电力费用。收集的唾液通过几个简单步骤便可提取DNA。抽取的DNA产量平均达110 μg / 2 mL唾液。

五、产品特点：

① 非侵入性采检方式免除了抽血的疼痛和降低了污染风险，并增加了取检的便利性，可由受检者自行取样。

② 仅需2ml的唾液样本，即可取得约110μg的DNA(不同个体产量差异很大)。

③ 采样后的检体可稳定地储存于室温环境一年以上。

六、唾液样品收集步骤：

1、用清水漱口1～2次，然后吐掉。

2、漱口后等候至少5分钟方可采集唾液，期间不要进食、饮用各种饮料。

3、将唾液(不是喉咙中痰液)吐到5ml 采集管CT中，直至2ml 刻度位置。(不可将痰液吐到收集管中，若唾液不足，可做口舌运动，促进分泌。浮在唾液上层的少量泡沫不包括计算在2ml唾液采集量内，采集过程必须在30分钟内完成)

4、将等体积2ml保存液SS全部倒在5ml唾液采集管CT中，充分颠倒混匀后旋紧盖子。

七、唾液DNA提取步骤(2ml唾液量举例，可按比例放大缩小每次提取的唾液量)：

细胞裂解

1、将保存液SS/唾液混合物放置于50°C 水浴中至少1小时或50°C空气孵箱至少2小时。

2、转移4ml混合物 (2 ml 唾液加2 ml保存液SS)到一个15 ml或者50 ml 的离心管。加入1ml裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速涡旋振荡10秒后室温放置 10分钟。

杂质沉淀

3、加入1. 7 ml杂质沉淀液IP到上述裂解混合物中。高速涡旋振荡25秒，充分混匀杂质沉淀液IP和裂解混合物。

4、8,000 x g 离心 5 分钟。沉淀的杂质和蛋白会在管底形成一个致密的沉淀团。如果蛋白沉淀不太致密，可以冰上放置5 分钟，然后重复步骤4。

DNA 沉淀

5、仔细转移上清(含有 DNA)到一个新的15 ml或者50 ml 的离心管。注意不要触动管底沉淀。加入5ml异丙醇。(唾液DNA含量较低时，加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些产量)，轻柔颠倒混匀50次（有时可以看见沉淀）。

6、2,500 x g 离心3分钟， 此时一般可在管底看到白色的DNA沉淀。

7、倒弃上清， 倒置后在吸水纸上轻敲几下以尽可能吸干。加入5ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀。

8、2,500 x g离心1分钟, 仔细倒去上清(沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了)。

9、倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟(不要干过头，也不要残留乙醇)。

DNA 溶解水化

10、加入250μl -400μl DNA溶解液DS重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀。

11、可以放置在65℃温育30-60分钟(不要超过一小时)，然后在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。

12、DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20°C 或者-80°C。